Что такое иммуноферментный анализ (ИФА)?
Иммуноферментный анализ (ИФА) — способ лабораторной диагностики инфекционных и аутоиммунных патологий, предполагающий выявление разнообразных химических соединений (патогенов) с помощью реакции антиген-антитело. При проникновении в организм бактериальных клеток или иных вредных агентов из внешней среды развиваются иммунные процессы, направленные на их связывание и удаление. Выделяются иммуноглобулины, способные соединяться с определенным патогеном. Иммунитет для борьбы с инфекцией использует клеточные и гуморальные механизмы. К гуморальным факторам помимо антител относят разнообразные медиаторы.
ИФА проводится с использованием иммунного и ферментативного компонентов. Изначально иммунитет с помощью иммуноглобулинов связывает чужеродные агенты, представленные отдельными молекулами, клеточными элементами или целым организмом. Иммунный компонент направлен на их обнаружение. Ферментативная реакция дает возможность отобразить и оценить результат действия первого компонента. ИФА — непрямой способ исследования, поскольку результаты выявляют специфические иммуноглобулины к патогену, а не самого возбудителя инфекционного процесса.
Иммуноферментный анализ желательно проводиться вместе с ПЦР-тестом для получения достоверных клинических данных. Значимость ИФА в современной медицинской практике сложно переоценить: его используют для уточнения степени прогрессирования болезни, оценки эффективности лечебных мероприятий и скрининга определенных патологических состояний.
Почему необходимо проверять морепродукты методом ИФА?
Морепродукты: мидии, морской гребешок, кальмар, устрицы являются источником высококачественного белка и микроэлементов, одновременно моллюски могут содержать и опасные вещества, одними из которых являются фикотоксины. Фикотоксины представляют собой группу веществ, продуцируемых некоторыми видами водорослей, микроводорослей и цианобактерий. Эти вещества способны аккумулироваться в организме морских и пресноводных животных и, при попадании в организм человека, вызывать отравления различной степени тяжести.
Токсины, входящие в группу PSP (paralitik shellfish poison) (паралитический яд моллюсков), являются одними из сильнейших нервнопаралитических ядов, известных человечеству. Сакситоксин является наиболее токсичным представителем данной группы веществ. Установлено, что тепловая обработка или замораживание не позволяют полностью освободить продукты от PSP. Проявления отравления PSP варьируются от чувства онемения и лёгкого покалывания в области губ до летального исхода. Около 15% всех зарегистрированных случаев отравления приводят к летальному исходу.
В среднетяжелых и тяжелых случаях происходит онемение кончика пальцев кистей рук и стоп, которое в течение 4-6 часов распространяется на руки, ноги, шею. Резко затруднены движения. Нарушаются функции черепно-мозговых нервов. Реже встречаются гастроинтестинальные симптомы, которые проявляются в виде тошноты, рвоты, диареи и болей в животе. Сознание пострадавших остаётся ясным. В случае летального исхода смерть наступает в результате развития лёгочной недостаточности в течение 2-12 часов с момента отравления. Антидота для токсинов PSP на данный момент не существует. Безопасный уровень содержания установлен FDA (Foodand Drag Administration) и составляет 80 мкг/100 г продукта.
Фикотоксины, входящие в группу DSP (diarrhoeic shellfish poison-диарейный яд моллюсков), получили своё название по синдрому вызываемого ими отравления. К данной группе относятся окадаиковая кислота и её производные — динофизистоксины. Основными симптомами при отравлении окадаиковой кислотой являются диарея, тошнота, рвота, боли в животе. При хронических интоксикациях возможно развитие опухолевых процессов. Безопасный уровень содержания DSP токсинов установлен Европейским Союзом в 2002 г. и составляет 160 мкг/кг продукта.
Еще одним представителем группы фикотоксинов является домоевая кислота, входящая в группу ASP (amnestic shellfish poison) (амнестический яд моллюсков). В зависимости от количества токсина, поступившего в организм, клиническая картина отравления может варьировать от гастроинтестинальных симптомов и неврологической симптоматики до перманентной потери краткосрочной памяти и летального исхода. В настоящее время норматив содержания токсина определён не более 20 мкг/г продукта.
Все эти вещества могут вызывать как острые отравления, так и отдаленные эффекты, в том числе канцерогенез.
В целях обеспечения контроля за безопасностью морепродуктов лабораториями освоен метод иммуноферментного анализа (ИФА) по определению данных токсинов. В основе процедуры анализа лежит взаимодействие антигенов с антителами, с последующим измерением оптической плотности биологических жидкостей в луночном иммунологическом микропланшете на одной или двух длинах волн.
(по данным коллектива авторов ФБУЗ «Центр гигиены и эпидемиологии в Приморском крае»)
Технология иммуноферментного анализа (ИФА)
В основе технологии анализа лежит взаимодействие антигенов с антителами, с последующим измерением оптической плотности биологических жидкостей в луночном иммунологическом микропланшете на одной или двух длинах волн.
ИФА тест-система Рыба: особенности применения
Тест-система «Рыба-ИФА» благодаря использованию уникального сочетания антител позволяет определить антиген, присутствующий в мышечной ткани ВСЕХ промысловых костистых рыб. Определение антигенов хрящевых рыб (акульих и осетровых) также возможно с помощью данного теста, но с меньшей чувствительностью.
В водных растворах или смеси гомогенатов мышечных белков Тест-система «Рыба-ИФА» определяет общий антиген рыб в концентрации около 5 нг/мл при расчете на антиген, выделенный из свежей трески. При сопоставлении с препаратами для кожного аллергологического тестирования (приктест) чувствительность Тест-системы «Рыба-ИФА» соответствует примерно титру 1:10,000–100,000 в зависимости от производителя. При сомнительных результатах рекомендуется проводить определение общего антигена рыб лабораторными методами (например, «РЫБА-ИФА» ХЕМА, кат. № K363, или ПЦР).
ИФА тесты для морепродуктов выполняются в течение 3х минут в домашних условиях и способны определить наличие или отсутствие рыбы в продукте.
Порядок проведения теста:
в упаковке поставляется флакон с буфером, пробирки для разведения и тест полоски.
- необходимо взять небольшой кусочек исследуемого продукта и поместить его в пробирку
- прилить немного жидкости из флакона с буферным раствором, плотно закрыть крышку пробирки
- интенсивно потрясти пробирку в течение минуты
- аккуратно достать тест-полоску и опустить ее до синей линии в пробирку на 10 секунд
- положить тест полоску на чистую ровную поверхность и подождать в течение минуты
- если проявилось 2 полоски, то в продукте присутствует рыба в качестве ингредиента, если появилась 1 полоска, то рыба в продукте отсутствует.
Преимущества метода ИФА
- Внедрение данного метода позволяет улучшить оценку качества морской продукции.
- Важное дополнительное преимущество ИФА — гибкость и универсальность формата. Одна и та же технология позволяет выявлять разные показатели, от антибиотиков до аллергенов, в продукции. При этом оборудование непосредственно для осуществления ИФА является универсальным, основное — это специальный фотометр для микропланшетов и набор дозаторов.
- ИФА тесты для морепродуктов позволяют получить один ключ к решению целого перечня самых разных проблем в области безопасности пищевой продукции.
- Для хозяйств в животноводстве важно отметить, что тот же метод используется для выявления заболеваний животных, контроля вакцинаций, управления воспроизводимостью стада (стельность).
- Методики ИФА доступны для самых разных лабораторий — от производственных до проверяющих, что также дает хорошую корреляцию результатов производственного контроля с результатами официального мониторинга.
Как внедрить метод ИФА в лабораторную практику?
Внедрить у себя ИФА может любая лаборатория, в том числе производственная. Достаточно базовой подготовки лаборанта, чтобы успешно освоить методику.
Подобрать ИФА тесты для морепродуктов для решения конкретных задач Вам помогут специалисты компании КОЛБА. Свяжитесь с нами по телефону или оставьте заявку. Специалист ответит Вам в течении 20 минут.
