Описание
Набор реагентов «IgG4-ИФА» предназначен для количественного определения концентрации IgG4 в cыворотке (плазме) крови методом твердофазного иммуноферментного анализа.
Содержание IgG4 в сыворотке крови составляет около 3% от общего уровня IgG.
Антитела подкласса IgG4 вырабатываются при длительном контакте с антигеном, что характерно для хронических грибковых инфекций, паразитарных инвазий, аутоиммунных заболеваний.
Особую роль IgG4 подкласс играет при аллергии. Повышенный уровень IgG4 антител выявлен в сыворотках пчеловодов, подвергавшихся укусам пчел.
Предполагается, что выработка IgG4-антител при лечении модифицированными аллергенами (аллергоидами) может считаться благоприятным прогностическим признаком. Вместе с тем, уровень IgG4 в сыворотке часто встречается у больных различными аллергическими заболеваниями (бронхиальная астма, атопический дерматит), в том числе и у пациентов с нормальным уровнем общего IgE.
Дефицит IgG4 подкласса часто сопряжен с IgG2-дефицитом и сопровождается ослаблением иммунного ответа.
Принцип работы набора IgG4-ИФА:
- Определение IgG4 основано на использовании «сэндвич»-варианта твердофазного иммуноферментного анализа.
- На внутренней поверхности лунок планшета иммобилизованы мышиные моноклональные антитела к IgG4 человека.
- В лунках планшета, при добавлении исследуемого образца, происходит связывание IgG4, содержащегося в исследуемом образце, с антителами на твердой фазе.
- Образовавшийся комплекс выявляют с помощью конъюгата мышиных моноклональных антител к IgG4 с пероксидазой хрена.
- В результате образуется связанный с пластиком «сэндвич», содержащий пероксидазу.
- Во время инкубации с раствором субстрата тетраметилбензидина (ТМБ) происходит окрашивание растворов в лунках.
- Интенсивность окраски прямо пропорциональна концентрации IgG4 в исследуемом образце.
- Концентрацию IgG4 в исследуемых образцах определяют по калибровочному графику зависимости оптической плотности
от содержания IgG4 в калибровочных пробах.
Оборудование и материалы, необходимые для работы с набором:
- фотометр вертикального сканирования, позволяющий измерять оптическую плотность содержимого лунок планшета при длине волны 450 нм;
- термостат, поддерживающий температуру +37 °C ± 0.1 °C;
- дозаторы со сменными наконечниками, позволяющие отбирать объемы в диапазоне 5–250 мкл;
- цилиндр мерный вместимостью 1000 мл;
- вода дистиллированная;
- перчатки резиновые или пластиковые;
- бумага фильтровальная.
Характеристики набора IgG4-ИФА
Схема проведения анализа | 30′(37°C)/30′(37°C)/ 10-20′ (ТМБ) |
Аналитическая чувствительность, не менее (или иные технические характеристики) |
0,02 г/л |
Сведения о калибровочных пробах и/или контрольных сыворотках | 5 (0-2,5 г/л), 1 контрольная сыворотка |
Объем (мкл) и тип исследуемого образца | 10 — сыворотка (плазма) крови |
Количество определений | 96 |
Антитела к ВИЧ 1,2, вирусу гепатита С и HBsAg отсутствуют
Контрольные сыворотки, входящие в состав набора, инактивированы.