ИФА тесты на антибиотики реализуют метод иммуноферментного анализа
Иммуноферментный анализ (сокращённо ИФА) — лабораторный иммунологический метод качественного или количественного определения различных низкомолекулярных соединений, макромолекул, вирусов и пр., в основе которого лежит специфическая реакция антиген-антитело.
Среди контаминантов продовольственного сырья и пищевых продуктов важное место занимают остатки антимикробных ветеринарных препаратов, используемых для лечения и профилактики инфекционных заболеваний животных и птицы, в том числе антибиотики тетрациклиновой группы и сульфаниламидные препараты. При их поступлении в организм человека могут возникать аллергические реакции, дисбиотические изменения микрофлоры кишечника, а также происходит формирование антибиотикоустойчивых форм микроорганизмов.
При определении методом ИФА в соответствии с настоящими Методическими указаниями антибиотиков тетрациклиновой группы предел обнаружения их составляет от 0,0015 мг/кг до 0,15 мг/кг в зависимости от вида продукта; для сульфаниламидных препаратов — от 0,002 мг/кг до 0,02 мг/кг в зависимости от вида продукта.
Принцип метода ИФА
Базовым принципом для количественного определения антибиотиков тетрациклиновой группы в пищевых продуктах является твердофазный конкурентный иммуноферментный анализ на полистироловых планшетах. Метод основан на конкуренции свободного антибиотика из исследуемых образцов и антибиотика, предварительно адсорбированного на твердой фазе (лунке планшета) в составе белкового конъюгата, за центры связывания специфичных к тетрациклинам антител во вносимом растворе. После отделения не связавшихся реагентов количество антител, прореагировавших с иммобилизованным антигеном, определяют с помощью вторичных антивидовых антител, меченных пероксидазой хрена. Количество связавшегося с антителами конъюгата вторичных антител определяют с помощью субстрат — хромогенной смеси. При этом количество определяемого антибиотика, содержащегося в исследуемом образце, обратно пропорционально регистрируемой оптической плотности продукта ферментативной реакции.
Виды ИФА
- ИФА сендвич-типа. Сэндвич-тип часто используется для анализа белков, напрм. пищевых аллергенов. Аналит (антиген) должен быть достаточно большим, чтобы иметь два сайта связывания (эпитопы). В этом методе специфический антиген (аналит) в образце связывается с антителами, прикрепленными к твердой фазе титрационного микропланшета. После промывки добавляют конъюгированное антитело, которое связывается со вторым сайтом связывания (эпитопом) антигена (аналита). После промывки добавляют субстрат, и результаты можно оценить по оптической плотности (OD). Сигнал пропорционален количеству антигена (аналита).
- Конкурентный ИФА. В конкурентном ИФА поверхности лунок микротитрационного планшета связаны с антителами. В лунку добавляют аналит из пробы и конъюгат. Начинается конкуренция за сайты связывания антител. После промывки добавляют субстрат, и измеряют оптическую плотность (ОП). Значение ОП обратно пропорционально количеству аналита в образце. Чем больше аналита, тем меньше значение ОП. Этот метод подходит для измерения образцов только с одним эпитопом, а также малых аналитов, таких как антибиотики или микотоксины.
Компоненты ИФА-тестов
Для тест-системы ИФА требуется несколько компонентов:
- планшеты микротитрования (MTP),
- конъюгат и субстрат,
- стандарты (калибраторы),
- буферы,
- стоп-раствор.
Кроме того, для большинства систем рекомендуется использовать положительный и отрицательный контроль, например спайк растворы.
Тест-системы для прямого иммуноферментного анализа (ИФА) антибиотиков в пищевой продукции животного происхождения:
Комплекс наиболее востребованных иммуноферментных тест-систем применяется для количественного определения антибиотиков в широком перечне молочной, мясной и рыбной продукции, меде и яйцах. Аттестованные методики выполнения измерений (МВИ) остаточных количеств антибиотиков с использованием выпускаемых тест-систем внесены в перечень стандартов к техническим регламентам Таможенного союза и Евразийского экономического союза
- ТР ТС 021/2011 «О безопасности пищевой продукции»,
- ТР ТС 033/2013 «О безопасности молока и молочной продукции»,
- ТР ТС 034/2013 «О безопасности мяса и мясной продукции»,
- ТР ЕАЭС040/2016 «О безопасности рыбы и рыбной продукции».
Тест-системы позволяют надежно и достоверно определять антибиотики в концентрациях существенно ниже регламентируемого предельно допустимого уровня остатков антимикробных веществ в продукции.
Диапазоны измерений (концентрации градуировочных растворов):
бацитрацин — 0,5-27,5 мкг/л,
стрептомицин — 0,5-40,5 мкг/л,
тетрациклин — 0,05-1,80 мкг/л,
хлорамфеникол 0,025-0,750 мкг/л.
Тест-системы укомплектованы всеми необходимыми для проведения анализа реагентами и совместимы с оборудованием аналитических лабораторий. Серийное производство тест-систем осуществляется на основе собственных технологий получения иммуноаналитических реагентов.
Преимущества метода ИФА для анализа на антибиотики
- Тесты показывают высокую чувствительность и надежность. Эти тест-системы используются производителями пищевых продуктов для тестирования сырья или готовой продукции.
- Для ИФА требуется только базовое лабораторное оборудование.
- Метод более простой в использовании по сравнению с ВЭЖХ и/или ЖХ-МС/МС.
Подобрать ИФА тесты на антибиотики для решения конкретных задач Вам помогут специалисты компании КОЛБА. Свяжитесь с нами по телефону или оставьте заявку. Специалист ответит Вам в течении 20 минут.
