Описание
Набор реагентов «секреторный IgA-ИФА» предназначен для количественного определения концентрации секреторного IgA в биологических жидкостях (см. таблицу М) методом твердофазного иммуноферментного анализа.
Секреторный IgA (sIgA) является основным иммуноглобулином, представленным в секретах слизистых оболочек и экзокринных желез. Около 90% sIgA синтезируется местно и не попадает в кровоток. По структуре и антигенным свойствам sIgA принципиально отличается от сывороточного IgA тем, что представляет собой комплекс из трех разных по происхождению и строению молекул. В состав sIgA входит две (или 4) молекулы IgA с молекулярной массой 160 КДа каждая, объединяющая их J-цепь (16 КДа) и секреторный компонент (80 КДа), который присоединяется в процессе трансэпителиального транспорта полимерного IgA.
sIgA играет важную роль в местном иммунитете организма, препятствуя прикреплению и проникновению бактерий и вирусов через эпителий, связывая патогены, попадающие в биологические жидкости, а также нейтрализуя вирусы, проникшие внутрь эпителиальных клеток.
В крови увеличение концентрации sIgA наблюдается при заболеваниях печени, при ряде аутоиммунных заболеваний, а также при некоторых опухолях.
Количественное определение sIgA требует специальных систем детекции, которые учитывают особенности строения этой комплексной молекулы.
Принцип работы набора СЕКРЕТОРНЫЙ IgA-ИФА:
- Определение секреторного IgA основано на использовании «сэндвич»- варианта твердофазного иммуноферментного анализа.
- На внутренней поверхности лунок планшета иммобилизованы мышиные моноклональные антитела к секреторному IgA человека.
- В лунках планшета, при добавлении исследуемого образца, происходит связывание секреторного IgA, содержащегося в исследуемом образце, с антителами на твердой фазе.
- Образовавшийся комплекс выявляют с помощью конъюгата мышиных моноклональных антител к альфа-цепи IgA с пероксидазой хрена.
- В результате образуется связанный с пластиком «сэндвич», содержащий пероксидазу.
- Во время инкубации с раствором субстрата тетраметилбензидина (ТМБ) происходит окрашивание растворов в лунках.
- Интенсивность окраски прямо пропорциональна концентрации секреторного IgA в исследуемом образце.
- Концентрацию секреторного IgA в исследуемых образцах определяют по калибровочному графику зависимости оптической плотностиот содержания секреторного IgA в калибровочных пробах.
Оборудование и материалы, необходимые для работы с набором:
- фотометр вертикального сканирования, позволяющий измерять оптическую плотность содержимого лунок планшета при длине волны 450 нм;
- термостат, поддерживающий температуру +37 °C ± 0.1 °C;
- дозаторы со сменными наконечниками, позволяющие отбирать объемы в диапазоне 25–250 мкл;
- цилиндр мерный вместимостью 1000 мл;
- вода дистиллированная;
- перчатки резиновые или пластиковые;
- бумага фильтровальная.
Характеристики набора СЕКРЕТОРНЫЙ IgA-ИФА
Схема проведения анализа | 90′(37°C)/30′(37°C)/ 10-20′ (ТМБ) |
Аналитическая чувствительность, не менее (или иные технические характеристики) |
0,6 г/л |
Сведения о калибровочных пробах и/или контрольных сыворотках | 6 (0-400 мкг/мл), 1 контрольная сыворотка |
Объем (мкл) и тип исследуемого образца | 5 — сыворотка (плазма) крови, слюна, бронхоальвеолярная жидкость, назальный смыв, вагинальный секрет, грудное молоко; 10 — моча |
Количество определений | 96 |