Описание
Тест-набор DASH-TEST– микробиологический тест для качественного обнаружения остаточных количеств ингибирующих веществ в сыром (коровьем, козьем, овечьем), пастеризованном, стерилизованном и предварительно восстановленном сухом молоке.
Ингибирующие вещества – это собирательное наименование химических веществ и соединений, которые препятствуют или тормозят развитие разного рода бактерий в пищевых продуктах.
Внимание! Препарат не предназначен для применения у животных, из молока которых производятся продукты для потребления человеком.
Принцип действия набора
Принцип действия основан на микробиологическом методе ингибирования. Лунки содержат среду со спорами Bacillus stearothermophilusи pH-индикатором. Во время культивирования при 65 ⁰С, споры прорастают, происходит рост бактерий и закисление среды. Значение pH уменьшается и индикатор изменяется с исходного фиолетового цвета на желтый.
Если в пробе молока и молочных продуктов есть антибиотики или другие ингибирующие вещества, они будут подавлять рост бактерий, тем самым не будет вырабатываться кислота, индикатор не поменяет цвет и останется исходно фиолетового цвета. Если антибиотики или другие ингибирующие вещества присутствуют в молоке и молочных продуктах или их концентрация ниже предела обнаружения, споры прорастают, происходит рост бактерий, вырабатывается кислота и среда становится желтой.
Состав набора DASH-TEST:
Отрывной блок с микролунками | 1 блок (96 отдельных тестов в блоке) |
Защитная пленка (алюминиевая фольга) | 1 |
Инструкция | 1 |
Колориметрическая карта | 1 |
Отрицательный контроль (молоко без антибиотиков) | 1 |
Положительный контроль (молоко, содержащее 4 мкг/кг Пенициллина G) | 1 |
Дозатор (одноканальная микропипетка) на 100 мкл | 1 |
Наконечники | 100 |
Условия хранения
- Температура хранения: 2-8 °С
- Срок хранения: 18 месяцев с даты производства
Дополнительные необходимые материалы, которые не входят в состав набора
- Нагревательное оборудование со стабильным температурным режимом 65 °С (водяная баня или сухой нагревательный блок (термостат-инкубатор)
Таблица чувствительности DASH-TEST:
Антибиотик | Предел ЕС | Предел обнаружения (мкг/л) |
Бета-лактамы | ||
Пенициллин G (Бензилпенициллин) | 4 | 2 |
Ампициллин | 4 | 2 |
Амоксициллин | 4 | 2 |
Нафциллин | 30 | 10 |
Клоксациллин | 30 | 20 |
Оксациллин | 30 | 6-10 |
Диклоксациллин | 30 | 10 |
Цефацетрил | 125 | 20 |
Цефалексин | 100 | 60-80 |
Цефалониум | 20 | 10 |
Цефоперазон | 50 | 25 |
Цефтиофур | 100 | 50 |
Цефкином | 20 | 75 |
Цефапирин | 60 | 2,5-4 |
Цефазолин | 50 | 10 |
Цефуроксим | 50 | 30 |
Тетрациклины | ||
Хлортетрациклин | 100 | 100 |
Доксициклин | * | 100 |
Окситетрациклин | 100 | 100 |
Тетрациклин | 100 | 100 |
Отрицательный контроль можно использовать для определения точного времени культивирования.
Процедура проведения DASH-TESTа:
- Аккуратно возьмите нужное количество микролунок, не повредив защитную пленку на оставшихся лунках. Микролунки следует выдержать при комнатной температуре в течение 15 минут. Остальные компоненты сразу же запечатайте. Компоненты должны хранится при температуре 2-8 °С.
- Снимите защитную пленку на микролунках, внесите 100 мкл тестируемого образца в каждую лунку (Внимание: не перемешивайте содержимое пипетированием). Для проведения контроля точности работы набора параллельно вносят отрицательный и положительный контрольные образцы.
- Закрыть защитной пленкой (алюминиевой фольгой) микролунки, поместить их вертикально на водяную банюили в термостат при температуре 65°Cи инкубировать при температуре (65±2) °С приблизительно от 2ч до 2ч 45мин (когда отрицательный контроль окрасится в желтый цвет).
Примечание: если необходимо определить чувствительность, отрицательный контроль можно использовать для определения точного времени культивирования.
Процедура: инкубировать 2ч, после этого начать контролировать цвет отрицательного контроля. Рекомендуется наблюдать каждые 5 минут. Когда отрицательный контроль окрасится в желтый цвет, немедленно считать результаты всех оставшихся образцов.
- После завершения реакции микролунки извлекают из водяной бани или термостата, определяют цвет их содержимого и получают результат:
отрицательный результат: цвет среды ярко желтый или желтый
положительный результат: цвет среды фиолетовый.
Результаты пределов обнаружения: если цвет среды между желтым и фиолетовым или цвет не изменился (остается фиолетовым), это означает, что концентрация антибиотика или ингибирующего вещества находится в пределах обнаружения набора и результат должен считаться положительным.
Интерпретация результатов
Ярко-желтый | Желто-фиолетовый | Фиолетовый |
Отрицат. (-) | Предел обнаружения (+) | Полож.(++) |
Пробоподготовка образцов молока и молочной сыворотки:
Сухое молоко, сухую молочную сыворотку необходимо растворить в теплой дистиллированной воде (согласно действующей нормативной документации) и тщательно перемешать.
Молоко, восстановленное сухое молоко, восстановленная сухая сыворотка должны быть жидкими и однородными. В пробах не должно быть сгустков и фаз разделения продукта. Температура пробы должна быть не ниже 4 градусов Цельсия, не замороженной и не нагретой. Перед испытанием тщательно перемешайте пробу.
Меры предосторожности:
- Рекомендуется, использовать молоко без антибиотика в качестве отрицательного контроля и молоко, содержащее высокую концентрацию антибиотиков, в качестве положительного контроля для контроля точности работы набора.
- Этот продукт является отрывным планшетом с микролунками. Взять необходимое кол-во микролунок, сперва отрезав защитную пленку (алюминиевую фольгу)ножом вдоль разграничительной линии, аккуратно не повредив пленку на оставшихся лунках во избежание загрязнения и трещин на питательной среде. Остальные компоненты сразу же запечатайте. Компоненты должны хранится при температуре 2-8 °С.
- Данный продукт не может напрямую определять кислотные вещества, например, йогурт.
- Данный набор чувствителен к антибиотикам и другим бактериостатическим (ингибирующим) веществам (например, моющие средства, дезинфицирующие средства, консерванты). При проведении эксперимента избегайте загрязнением данными веществами. Необходимо мыть и тщательно вытирать руки перед проведением тестирования, проводить тестирование на чистой поверхности.
- Сильно не встряхивать микропланшет, чтобы твердая среда не растряслась, иначе это повлияет на окончательный цвет.
- Микропланшет хранить в вертикальном положении в темном месте и при постоянной температуре, желательно при температуре 2-8 °С. Не замораживать. Температурные колебания могут размягчить и разрыхлить среду. Слишком высокая температура приведет к сокращению срока годности.
- Температура для инкубирования среды должна строго контролироваться при 65+2°С, если температура слишком высокая или слишком низкая, или есть температурные колебания, это повлияет на время реакции и чувствительность определения.
- С помощью данного теста различный тип молочных продуктов тестируется разное количество времени (от 2ч до 2ч 45мин).
- По мере увеличения срока хранения, требуемое время культивирования возможно постепенно увеличиться. Реагенты с уже истекающим сроком годности время ингибирования должно быть увеличено и должно быть больше, чем для только что произведенных наборов, поэтому рекомендуется при использовании такого набора время инкубации должно быть связанно с моментом, когда отрицательный контроль станет желтого цвета.
- Использованный микропланшет можно утилизировать после его стерилизации, например, под высоким давлением.