Контроль остаточных количеств антибиотиков является важной частью производственного контроля на животноводческих предприятиях, бойнях, мясокомбинатах, птицефабриках, комбикормовых заводах и в испытательных лабораториях.
Для первичного выявления антимикробных веществ применяются микробиологические скрининговые методы. Один из таких методов — Premi®Test, позволяющий менее чем за четыре часа получить качественный результат о наличии или отсутствии в исследуемом образце веществ, подавляющих рост тестового микроорганизма.
PremiTest предназначен прежде всего для исследования свежего мяса крупного рогатого скота, свиней и птицы. Производитель также предусматривает возможность применения теста для кормов, рыбы, креветок, яиц, печени, почек и других образцов. Однако для матриц, отличных от свежего мышечного мяса, требуется специальная пробоподготовка и индивидуальная валидация метода пользователем.
Важно понимать, что PremiTest является скрининговым, а не количественным подтверждающим методом. Он позволяет быстро выделить подозрительные партии, но не устанавливает точное наименование антибиотика и его концентрацию.
PremiTest — это готовый микробиологический тест в формате ампул. В каждой ампуле находится плотная питательная среда, индикатор кислотности и стандартизированное количество спор термофильного микроорганизма Geobacillus stearothermophilus, ранее обозначавшегося как Bacillus stearothermophilus.
Тестовый микроорганизм чувствителен к различным антибиотикам и другим антимикробным веществам.
После внесения пробы ампулу инкубируют при температуре 64 ± 1 °C:
Таким образом, PremiTest регистрирует не конкретное химическое соединение, а общий ингибирующий эффект исследуемого образца.
PremiTest относится к широкоспектральным микробиологическим тестам. Производитель указывает чувствительность к препаратам следующих групп:
Группа антимикробных веществ | Примеры |
β-лактамные антибиотики | Пенициллин, амоксициллин, ампициллин, клоксациллин |
Цефалоспорины | Цефапирин и другие представители группы |
Тетрациклины | Тетрациклин, хлортетрациклин, окситетрациклин, доксициклин |
Макролиды | Эритромицин, тилозин, тилмикозин |
Сульфаниламиды | Сульфадиазин, сульфадиметоксин, сульфатиазол |
Аминогликозиды | Представители группы аминогликозидных антибиотиков |
Хинолоны и фторхинолоны | Представители хинолоновой группы |
Амфениколы | Антимикробные препараты амфеникольной группы |
Полипептидные антибиотики | Представители полипептидной группы |
Другие ингибирующие вещества | Линкомицин, тиамулин, дапсон и отдельные другие соединения |
Чувствительность теста неодинакова для разных веществ. Для некоторых антибиотиков уровень обнаружения находится около установленных предельно допустимых уровней, для других соединений реакция может появляться только при более высокой концентрации. Поэтому отсутствие реакции PremiTest нельзя интерпретировать как доказательство отсутствия абсолютно всех антибиотиков в любых концентрациях.
Внимание:
Этот тест чрезвычайно чувствителен к антибиотикам и другим ингибирующим веществам, следует всегда избегать любого загрязнения такими материалами, рекомендуется тщательно вымыть руки перед началом процедуры тестирования. Используйте бумажную салфетку или чистое полотенце, чтобы высушить руки.
амоксициллин — 5-15; сульфаквиноксалин — <50- <100; cульфамеразин — 25- <100; сульфаниламид — 25- <100; сульфаметоксипиридин – 25-<100; сульфапиридин -<50 — <100; сульфадиметоксин – 25 — < 100; сульфкванидин- 150-<200; сульфаметизол – 50-100; сульфадиазин – 25-75; сульфаметазин -50-100; сульфатиазол – 25- <100; сульфизоксазол – 25-<100; демеклоциклин – 50; тилозин – 25 -50; эритромицин – 50 – 100; оксациллин — 100; цефкином — 75-100; доксициклин — 100-200; цефтиофур — 100-400; хлортетрациклин — 100-1000; окситетрациклин — 100-400; тетрациклин — 50-200; сульфахлоропиридазин — 25- <100; сульфаметиозол — <50- <100; сульфаметоксазол — 25; демеклоциклин – 50; тилозин – 25 -50; эритромицин – 50 – 100; оксациллин — 100; цефкином — 75-100; доксициклин — 100-200; цефтиофур — 100-400;
| хлортетрациклин — 100-1000; окситетрациклин — 100-400; тетрациклин — 50-200; сульфахлоропиридазин — 25- <100; сульфаметиозол — <50- <100; сульфаметоксазол — 25; гентамицин – 100; стрептомицин -1000-3000; неомицин – 200-300; спектиномицин -5000; оксолиновая кислота — >10000; энрофлоксацин ->600; линкомицин – 100; тилмикозин – 50; спирамицин – 1000; ампициллин — 5; пенициллин G – 2,5-5; клоксациллин – 100- >100; флумеквин — >100; монензин – 1250; авиламицин ->5000; флорфеникол – 100-5000; хлорамфеникол – 2500; триметоприм — 50; наразин -1250; ампролиум ->2000; фосфомицин — >1500; ронидазол — >5000; фуразолидон — >1500; ласалоцид – 10000; вирджиниамицин – 500; бацитрацин – 500; цинк-бацитрацин – 1250; колистин — <1000; салиномицин – 1000; |
Для свежего мяса производитель приводит следующие значения способности обнаружения:
Вещество | Примерная способность обнаружения |
Пенициллин G | 6 мкг/кг |
Амоксициллин | 11 мкг/кг |
Клоксациллин | 150 мкг/кг |
Хлортетрациклин | 160 мкг/кг |
Окситетрациклин | 160 мкг/кг |
Доксициклин | 100 мкг/кг |
Сульфадиметоксин | 75 мкг/кг |
Сульфадиазин | 90 мкг/кг |
Эритромицин A | 200 мкг/кг |
Тилозин A | 90 мкг/кг |
Указанные значения получены для мясного сока. В кормах, субпродуктах, комбинированном сырье и других матрицах фактическая чувствительность может отличаться из-за особенностей экстракции, кислотности, состава и присутствия природных ингибирующих веществ.
Мясо
Официально валидированная область применения охватывает свежее мышечное мясо:
В область сертифицированной валидации не входит мясной фарш. Для измельчённого мяса, мясных полуфабрикатов и готовой продукции необходимо отдельно оценивать влияние рецептуры и матрицы.
Для отбора проб производитель рекомендует использовать нежирную мышечную ткань. Примерами подходящих образцов являются:
Не следует без специального протокола заменять мышечную ткань языком, печенью или почками. Для субпродуктов используются отдельные рекомендации по пробоподготовке.
Корма
PremiTest может применяться для скрининга кормов на наличие антимикробных веществ, например:
Однако корм является сложной матрицей. Жиры, органические кислоты, минеральные соли, консерванты, растительные компоненты и собственная микрофлора могут влиять на результат.
Производитель прямо указывает, что рекомендации по пробоподготовке кормов предоставляются отдельно, а метод должен быть индивидуально валидирован пользователем. Поэтому стандартную процедуру, предназначенную для мясного сока, нельзя автоматически переносить на сухой комбикорм без проверки.
Мясное и животное сырьё
PremiTest может использоваться при исследовании:
Для каждой новой матрицы необходимо установить, насколько эффективно антимикробное вещество переходит в исследуемый экстракт и не вызывает ли сама матрица подавление роста тестового микроорганизма.
Животноводческие хозяйства
На ферме тест может применяться:
Отрицательный результат может использоваться как дополнительный элемент внутреннего контроля, но не отменяет установленный ветеринарным препаратом период ожидания.
Бойни и убойные предприятия
На убойных предприятиях PremiTest используется для:
Мясокомбинаты и предприятия пищевой промышленности
На мясоперерабатывающем предприятии тест может быть включён во входной контроль:
Результаты PremiTest позволяют до начала производства отделить подозрительное сырьё от сырья, допускаемого к дальнейшей оценке.
Комбикормовые предприятия
На производстве кормов тест может использоваться:
Для кормов необходимо применять утверждённую предприятием пробоподготовку и подтверждённые характеристики метода.
Испытательные и производственные лаборатории
PremiTest удобен как предварительный широкоспектральный тест, когда заранее неизвестно, какая именно группа антибиотиков могла присутствовать в образце.
Лаборатория может использовать результат для выбора дальнейшей аналитической схемы:
PremiTest даёт качественный результат. Он не показывает точную концентрацию и обычно не определяет конкретный антибиотик.
Отрицательный результат
Нижние две трети содержимого ампулы изменили цвет с фиолетового на жёлтый. Это означает, что тестовый микроорганизм развивался нормально и в исследуемом экстракте не обнаружено ингибирующих веществ в концентрации, равной или превышающей предел обнаружения применённой процедуры.
Корректная формулировка результата:
Антимикробные вещества на уровне чувствительности метода не обнаружены.
Некорректная формулировка:
В образце полностью отсутствуют антибиотики.
Тест не исключает наличия вещества ниже предела обнаружения или антибиотика, к которому тест имеет недостаточную чувствительность.
Подозрительный или положительный результат
Среда осталась фиолетовой либо не произошло отчётливого перехода к жёлтому цвету. Это означает, что рост тестового микроорганизма был подавлен. Возможные причины:
Корректная формулировка результата:
Получен подозрительный результат на наличие ингибирующих антимикробных веществ. Требуется подтверждающее исследование.
PremiTest не позволяет по фиолетовой окраске установить, какой именно препарат присутствует в пробе.
Промежуточная окраска
Коричневая, красноватая или смешанная жёлто-фиолетовая окраска может соответствовать пограничной реакции.
В такой ситуации рекомендуется:
Визуальная оценка цвета зависит от оператора, поэтому пограничный результат нельзя использовать как окончательное доказательство соответствия или несоответствия партии.
Результат | Действие с образцом | Действие с партией |
Жёлтая окраска, контроль корректен | Зафиксировать отрицательный результат | Продолжить приёмку или производство в соответствии с внутренней процедурой |
Фиолетовая окраска | Повторить исследование и отобрать резервную пробу | Временно изолировать или заблокировать партию |
Промежуточная окраска | Повторить тест с контролями | Не принимать окончательное решение до повторного анализа |
Повторно подозрительный результат | Направить пробу на подтверждающий анализ | Сохранить карантинный статус партии |
Подтверждено превышение | Оформить несоответствие | Отклонить, вернуть, утилизировать или использовать согласно требованиям законодательства |
Подтверждающий метод отрицательный | Оценить матричный эффект и пробоподготовку | Решение принимает ответственное лицо по утверждённой процедуре |
Отрицательный результат может применяться:
Он не заменяет декларацию соответствия, ветеринарные документы и результаты официального лабораторного контроля, если они требуются.
Подозрительная партия не должна автоматически признаваться содержащей конкретный антибиотик.
Рекомендуемый порядок действий:
Производитель PremiTest прямо указывает, что при серьёзных последствиях для пользователя результат скрининга должен подтверждаться валидированным полным аналитическим методом, например ВЭЖХ или ЖХ-МС/МС.
Ниже приведена процедура для свежей мышечной ткани. Именно мясо крупного рогатого скота, свиней и птицы входит в основную валидированную область применения теста.
Что потребуется для анализа:
Материал или оборудование | Назначение |
Ампулы PremiTest | Проведение микробиологической реакции |
Одноразовые пипетки или дозатор | Внесение 100 мкл образца |
Пресс для мяса | Получение мясного сока |
Инкубатор или водяная баня | Поддержание температуры 64 ± 1 °C |
Калиброванный термометр | Контроль температуры |
Таймер | Контроль преддиффузии и инкубации |
Ножницы | Отделение ампул |
Деминерализованная вода | Двукратное промывание ампул |
Перфорированная закрывающая плёнка | Предотвращение испарения |
Отрицательный контроль той же матрицы | Определение момента считывания |
Положительный контроль | Проверка чувствительности процедуры |
Холодильник 3–10 °C | Хранение тестов |
Важно! Ампулы хранят при температуре 3–10 °C. Замораживать их нельзя.
Очистите рабочую поверхность и тщательно вымойте руки. Необходимо исключить контакт ампул, пипеток и образцов с:
PremiTest имеет высокую чувствительность к антимикробным соединениям, поэтому случайное загрязнение может привести к ложноположительному результату.
Включите инкубатор или водяную баню и установите температуру 64 ± 1 °C.
Температуру следует проверить калиброванным термометром. Недостаточная температура замедляет прорастание спор, а превышение установленного диапазона может нарушить развитие тестового микроорганизма.
Не рекомендуется добавлять холодные ампулы в уже работающую серию, поскольку это может временно снизить температуру блока.
Достаньте необходимое количество ампул из холодильника и доведите их до комнатной температуры — ориентировочно 18–25 °C.
На каждую серию предусматривают:
Отделяйте ампулы ножницами или в соответствии с конструкцией рамки. Не отрывайте их так, чтобы повреждалась фольга соседних ячеек. Открытую ампулу нельзя возвращать на хранение.
Используйте репрезентативную пробу свежей нежирной мышечной ткани.
Рекомендуемый объём исходного образца — не менее 2 см³. В расширенной инструкции указывается около 4 г свежей нежирной мышечной ткани для получения достаточного количества жидкости.
Не следует использовать:
Проба должна отражать исследуемую партию. При групповом содержании животных количество отбираемых образцов устанавливают на основании оценки риска и схемы производственного контроля.
Поместите кусок нежирного мяса в пресс и постепенно увеличивайте давление.
Необходимо получить около 200–250 мкл мясного сока.
Для облегчения выделения жидкости пресс можно предварительно нагреть. Производитель также допускает получение мясного сока после замораживания и размораживания образца.
При этом следует избегать:
После каждого образца пресс необходимо тщательно очищать в соответствии с лабораторной процедурой.
Нанесите на каждую ампулу идентификационный код образца.
Осторожно снимите защитную фольгу только с необходимого количества ампул. Отверстие должно быть достаточно свободным для последующего промывания.
Не повреждайте поверхность агара внутри ампулы.
Для каждого образца используйте новую одноразовую пипетку или чистый наконечник дозатора.
Внесите на поверхность агара 100 мкл мясного сока. В расширенной инструкции допускается объём 100 ± 5 мкл.
Жидкость следует вносить медленно, не касаясь наконечником питательной среды и не повреждая агар.
Необходимо убедиться, что наконечник не заблокирован частицами мяса. Объём 100 мкл имеет значение для достижения установленной чувствительности теста.
Оставьте ампулы при комнатной температуре 20–25 °C на 20 минут.
На этом этапе антибиотики и другие растворимые ингибирующие вещества переходят из внесённой жидкости в агар.
Не следует:
После преддиффузии аккуратно удалите жидкость из ампулы.
Промойте ампулу два раза деминерализованной водой:
Использовать водопроводную воду нельзя.
Не следует резко постукивать ампулой по поверхности: от агара может отделиться фрагмент, что способно привести к ошибочному результату.
.
Закройте ампулы специальной перфорированной плёнкой, входящей в комплект PremiTest.
Плёнка предотвращает чрезмерное испарение и одновременно обеспечивает предусмотренный режим газообмена. Использование неподходящей герметичной или неперфорированной плёнки может привести к конденсации и ошибочным результатам.
Установите ампулы в предварительно нагретый инкубатор или водяную баню при температуре 64 ± 1 °C.
Отрицательный контроль должен инкубироваться одновременно с исследуемыми образцами.
Ориентировочное время инкубации составляет около трёх часов. Однако окончательный момент считывания определяют не только по таймеру, а по изменению цвета отрицательного контроля.
Начните проверять отрицательный контроль примерно через 2 часа 40 минут после начала инкубации.
Далее оценивайте его каждые пять минут.
Когда отрицательный контроль изменит цвет с фиолетового на жёлтый, необходимо сразу сравнить с ним исследуемые образцы. Задержка считывания более пяти минут может повлиять на чувствительность процедуры.
Если отрицательный контроль не стал жёлтым через четыре часа, анализ считают некорректным и повторяют.
В качестве отрицательного контроля нельзя использовать воду. Необходим образец той же матрицы, достоверно не содержащий антибиотиков и ранее показавший отрицательный результат.
Оценивайте только нижние две трети содержимого ампулы.
Цвет | Интерпретация |
Ярко-жёлтый или отчётливо жёлтый | Антимикробные вещества выше чувствительности теста не выявлены |
Фиолетовый | Подозрение на наличие антибиотиков или других ингибирующих веществ |
Частично фиолетовый, коричневый, красноватый | Пограничный или сомнительный результат, требуется повторение |
Не изменился цвет отрицательного контроля | Серия недействительна |
Верхняя часть агара может иметь другой оттенок из-за мясного сока или особенностей инкубации, поэтому решение принимают по нижней части ампулы.
В лабораторном журнале или информационной системе фиксируют:
Рекомендуется сохранять фотографию ампул в стандартизированных условиях освещения, особенно при получении пограничной окраски.
Для кормов, печени, почек, рыбы, яиц и других нестандартных матриц нельзя без проверки использовать процедуру выделения мясного сока.
Производитель предлагает отдельные рекомендации по подготовке таких образцов, но требует их индивидуальной валидации пользователем.
Необходимо точно указать, что исследуется:
Для разных матриц может потребоваться различная экстракция.
Следует получить актуальную инструкцию для нужной матрицы.
В протоколе должны быть установлены:
Без этих данных нельзя достоверно гарантировать чувствительность анализа.
Сухие корма неоднородны, поэтому анализ одной точечной пробы может не отражать всю партию.
Следует:
Схема отбора должна соответствовать программе производственного контроля предприятия.
Экстракцию проводят строго по матричной инструкции.
Полученный экстракт должен быть достаточно однородным и не содержать крупных частиц, способных повредить агар или заблокировать пипетку.
Нельзя самостоятельно выбирать растворитель или разбавление только на основании удобства: чрезмерное разбавление может снизить чувствительность, а неподходящий экстрагент — подавить рост микроорганизма.
Для корма или другого сырья требуется контрольный образец того же типа, в котором подтверждено отсутствие антибиотиков.
Вода или чистый растворитель не заменяют матричный отрицательный контроль, поскольку не учитывают естественное влияние продукта на тест.
После подготовки экстракта выполняют этапы, предусмотренные утверждённой процедурой:
Перед включением метода в постоянную работу необходимо оценить:
Для подтверждения работоспособности используют чистые матрицы и образцы с известными добавками целевых антибиотиков.
Ошибка | Возможное последствие |
Использование водопроводной воды | Неконтролируемое влияние на микроорганизм |
Отсутствие отрицательного контроля | Нельзя определить правильный момент считывания |
Использование воды вместо отрицательной матрицы | Некорректная оценка анализа |
Повреждение агара наконечником | Нарушение диффузии и изменение результата |
Объём меньше 100 мкл | Снижение чувствительности |
Объём значительно больше 100 мкл | Изменение условий диффузии |
Загрязнение дезинфицирующим средством | Ложноположительный результат |
Инкубация ниже 63 °C | Замедление реакции |
Инкубация выше 65 °C | Подавление тестового микроорганизма |
Слишком раннее считывание | Ложное подозрение на антибиотики |
Слишком позднее считывание | Снижение способности выявлять пограничные концентрации |
Оценка верхней части ампулы | Ошибка визуальной интерпретации |
Использование фарша как валидированной матрицы | Неподтверждённая достоверность |
Прямое исследование сухого корма без экстракции | Недостоверный результат |
Многократное размораживание образца | Разрушение антибиотика или изменение матрицы |
К практическим преимуществам метода относятся:
Официальный стартовый комплект включает пресс для мяса, инкубатор, таймер и ножницы. В качестве альтернативы инкубатору допускается водяная баня, способная поддерживать 64 ± 1 °C.
PremiTest имеет принципиальные ограничения:
Поэтому PremiTest наиболее эффективен как первый уровень системы контроля: он быстро отделяет явно отрицательные образцы от партий, требующих дополнительного исследования.
Рациональная схема применения может выглядеть следующим образом:
Для комбикормового предприятия аналогичная схема может использоваться для проверки очистки производственной линии после лечебного корма.
Показывает ли PremiTest точное количество антибиотика?
Нет. PremiTest является качественным скрининговым тестом. Он показывает наличие или отсутствие общего ингибирующего эффекта на уровне чувствительности метода.
Можно ли определить, какой антибиотик найден?
Нет. Фиолетовый результат не позволяет отличить пенициллин от тетрациклина, макролида или другого ингибирующего вещества. Для идентификации требуется подтверждающий аналитический метод.
Сколько времени занимает анализ?
Преддиффузия занимает 20 минут, основная инкубация — приблизительно три часа. Общий результат обычно получают менее чем за четыре часа.
Что означает жёлтый цвет?
Жёлтый цвет означает рост тестового микроорганизма и отсутствие ингибирующих веществ на уровне или выше предела обнаружения применённой процедуры.
Что означает фиолетовый цвет?
Фиолетовый цвет означает подавление роста микроорганизма. Это подозрение на антибиотики или другие ингибирующие вещества, которое необходимо подтвердить.
Можно ли анализировать замороженное мясо?
Да, после правильного размораживания. Необходимо избегать многократных циклов замораживания и размораживания и не использовать воду, скопившуюся в упаковке, как исследуемый мясной сок.
Можно ли исследовать фарш?
Фарш не входит в область сертифицированной NF VALIDATION для PremiTest. Его исследование возможно только после отдельной оценки и валидации пробоподготовки.
Можно ли использовать PremiTest для кормов?
Да, как скрининговый инструмент после применения специальной пробоподготовки. Производитель требует индивидуальной валидации метода для кормовой матрицы.
Нужно ли подтверждать положительный результат?
Да. Если результат может привести к блокировке, возврату или утилизации партии, его следует подтвердить валидированным методом, способным идентифицировать и количественно определить конкретный препарат.
Тесты PremiTest позволяют быстро проводить скрининг мяса, кормов и сырья на присутствие антибиотиков и других антимикробных веществ.
Наиболее надёжно метод применяется к свежему мышечному мясу говядины, свинины и птицы. Для кормов, субпродуктов, фарша и сложных пищевых матриц требуется отдельная пробоподготовка и внутрилабораторная валидация.
Жёлтый результат указывает на отсутствие ингибирующих веществ выше чувствительности метода. Фиолетовый или промежуточный цвет рассматривается как подозрительный и служит основанием для блокировки партии, повторного анализа и подтверждения методом ВЭЖХ, ЖХ-МС/МС или другой утверждённой аналитической процедурой.
На практике PremiTest следует использовать не как замену полноценному лабораторному исследованию, а как первый, быстрый и экономичный этап системы контроля остаточных количеств антибиотиков.
позволяют быстро проводить скрининг мяса, кормов и сырья на присутствие антибиотиков и других антимикробных веществ.
Наиболее надёжно метод применяется к свежему мышечному мясу говядины, свинины и птицы. Для кормов, субпродуктов, фарша и сложных пищевых матриц требуется отдельная пробоподготовка и внутрилабораторная валидация.
Жёлтый результат указывает на отсутствие ингибирующих веществ выше чувствительности метода. Фиолетовый или промежуточный цвет рассматривается как подозрительный и служит основанием для блокировки партии, повторного анализа и подтверждения методом ВЭЖХ, ЖХ-МС/МС или другой утверждённой аналитической процедурой.
На практике PremiTest следует использовать не как замену полноценному лабораторному исследованию, а как первый, быстрый и экономичный этап системы контроля остаточных количеств антибиотиков.
Заказать оригинальные Тесты PremiTest вы можете в компании КОЛБА. Просто Оставьте заявку или свяжитесь удобным для вас способом.
Пожалуйста, заполните форму. Ответим в течение 30 минут
Помним подвиг дедов, храним историю, гордимся великой Россией!
Желаем всем провести этот праздник в мире и взаимопонимание, в кругу семьи и близких.
С 09 по 11 мая выходные дни. Все оставленные вами заявки будут оперативно отработаны 12.05.2026.
С 01 по 03 марта уходим веселиться на природу и трудиться жаря шашлыки, чего и вам желаем!
Мы используем необходимые файлы cookie, для работы нашего сайта.
Продолжая использовать сайт, вы соглашаетесь с использованием файлов cookie на нашем сайте в соответствии с нашей политикой конфиденциальности.
